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从黄精中单独提取黄酮类物质通常需要结合黄酮的理化性质(如极性、溶解性、酸碱性等)进行分离纯化。以下是具体步骤和注意事项:
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1. 原料预处理
· 干燥与粉碎:将黄精根茎洗净后烘干(50-60℃避免高温破坏黄酮),粉碎成粗粉(40-60目),增大接触面积。
· 脱脂(可选):若样品脂肪含量高,可用石油醚或正己烷回流脱脂,避免干扰后续提取。
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2. 黄酮的初步提取
方法选择
· 醇提法(常用):
· 溶剂:60-70%乙醇(黄酮苷类)或甲醇(苷元类)。
· 条件:料液比1:10~1:15,60-70℃回流1-2小时,重复2-3次。
· 优点:兼顾极性与非极性黄酮,适合大多数黄精黄酮(如芹菜素、木犀草素衍生物)。
· 热水提取(针对黄酮苷):
· 80-90℃浸提,但可能溶出多糖等杂质,后续纯化压力大。
· 超声/微波辅助:
· 超声(40kHZ, 30分钟)或微波(300W, 5分钟)可提高效率,缩短时间。
浓缩与初步除杂
· 合并提取液,减压浓缩至无醇味,得浸膏。
· 除多糖/蛋白质:
· 加入3-4倍体积95%乙醇沉淀多糖,静置后离心取上清。
· 或用Sevage法(氯仿:正丁醇=4:1)去除蛋白质。
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3. 黄酮的纯化
液液萃取法
· 用乙酸乙酯或正丁醇萃取水相中的黄酮(黄酮苷元更易溶于乙酸乙酯,苷类偏向正丁醇)。
· 重复3-4次,合并有机相,减压浓缩。
柱层析法(关键步骤)
· 吸附剂选择:
· 聚酰胺柱:适合黄酮(氢键吸附),用30%-95%乙醇梯度洗脱(如先水洗去糖,再用50%乙醇洗黄酮)。
· 硅
